微流控应用：微滴/微球制备仪制备透明质酸(HAMA)微球-液滴微流控实验视频教程

本视频为使用FluidicLab微滴/微球制备仪透明质酸(HAMA)微球实验视频教程

实验所使用设备

微滴制备仪(FluidicLab)、离心机(湘仪)、普通光学显微镜、电脑(win10以上系统)、超声机(语盟，YM-020T)、常规紫外灯(405 nm光源)

实验所用微流控芯片

FludicLab PDMS-FF-100

实验所用试剂
微滴生成油(Drop-Surf, FluidicLab)、破乳剂(Drop-Surf, FluidicLab)、透明质酸(HAMA,FluidicLab)、LAP (Macklin,L862544-1g)

实验步骤（以视频字幕为准）
1.试剂配制

(1)4% 透明质酸水溶液配制
称取0.04g透明质酸固体,加入0.96 g超纯水,避光超声震荡溶解。

(2)0.2%LAP水溶液配制
称取0.010gLAP粉末,加入4.99 g超纯水,避光超声振荡溶解。

(3)水相溶液配制(2% 透明质酸+0.05% LAP)
取400 uL 4% 透明质酸溶液,200 uL0.2% LAP溶液,加入200 uL超纯水，避光震荡均匀,并用0.22 um针式过滤器过滤处理。

2.透明质酸微滴制备和固化:

• 连接微滴生成仪管路(详见《微滴制备仪使用手册》);
• 取5 mL微滴生成油,加入通道一储液池并与气管连接;
• 将装有水相溶液的黑色离心管与通道二连接并与气管连接;
• 打开空气压缩机及气源处理开关;
• 在电脑端设置通道一(油相)、通道二(水相)压力排出管路及芯片中的空气;
• 待空气排出(管路及芯片充满液体)后,分别设定油相、水相流速为7.5 uL/min和10 uL/min;
• 按《微滴制备仪使用手册》调整流速增加反馈值(Feedback)以快速达到预定设置值;
• 微液滴稳定生成后,即可开始接收至透明离心管中:
• 30 min后停止收集,置于405 nm紫外灯下照射5 min固化。

3.透明质酸微球固化后处理

• 取出离心管底部的微滴生成油；
• 按V_球:V=1:2 加入破乳剂,振荡;
• 1000rpm,30s离心处理并取出下部溶液(后续可重复操作1-2次);
• 按V_球:V=1:4加入PBS溶液,振荡;
• 1000rpm,30 s离心处理并取出上部溶液(后续可重复操作1-2次);
• 在显微镜下观察固化后透明质酸微球。

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