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DTT溶解聚丙烯酰胺水凝胶微球制备

我们提供了两种聚丙烯酰胺水凝胶微球的制备方法:

1. 常规的聚丙烯酰胺水凝胶微球制备。

2. 可控降解的聚丙烯酰胺水凝胶微球的制备。

基于微液滴的单细胞测序方以其*高通量和单细胞的分辨率引发了生物学的一次革命。在微流控单细胞测序技术中,barcode gel beads是其技术的核心。目前常见的用于高通量单细胞测序的barcode gel beads均为聚丙烯酰胺水凝胶微球。

该微球通过二硫键交联形成高分子骨架,在交联体系中存在5’-Acrydite修饰的引物时,引物可以共价结合在微球骨架上,并伴随微球和单细胞包裹在单个微滴中。微球骨架在DTT(二硫苏糖醇)存在时快速发生降解,将微球上交联的引物释放到液滴中,在细胞裂解后和mRNA结合,完成反转录和扩增。

常规兼容10X Genomics体系的微球直径为50-53微米。

DTT溶解聚丙烯酰胺水凝胶微球制备插图

图一、固化后的聚丙烯酰胺水凝胶微球

DTT溶解聚丙烯酰胺水凝胶微球制备插图1

图二 聚丙烯酰胺水凝胶微球粒径分布。

左:10X barcode gel beads粒径分布 ;  右:FluidicLab微球粒径分布

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