微流控应用:壳聚糖微球制备 — 保姆级实验视频教程

设备:FluidicLab自动微球/微液滴生成仪

试剂:微滴生成油(Drop-Surf)、破乳剂(Drop-Surf)、壳聚糖(FluidicLab)、冰乙酸(麦克林)、50%戊二醛(阿拉丁)

实验步骤:

操作参考:

1. 试剂配置

5%壳聚糖水相溶液:

将0.5 g壳聚糖加入到约9.3 g的超纯水中,并加入200 μL (约0.2g)冰乙酸辅助溶解,振荡并放置于85 ℃的鼓风干燥箱中加热溶解;待完全溶解后用0.22 μm的针式过滤器过滤备用。

1%戊二醛油相溶液配置: 取500 uL微滴生成油,加入体积为10 μL的50%戊二醛,振荡均匀备用。

2. 微滴生成仪制备壳聚糖微液滴

  1. 连接微滴生成仪管路(详见《微滴生成仪使用手册》)
  2. 在通道一中的储液池中加入约5 mL微滴生成油
  3. 在通道二中的储液池中加入约1 mL已过滤处理的5%壳聚糖水溶液
  4. 打开空气压缩机及气源处理开关
  5. 在微液滴收集端放置容器接收废液
  6. 在电脑端设置通道一(油相)和通道压力(水相)排出管路及芯片中的空气
  7. 待空气排出(管路及芯片充满液体)后,设定油相和水相流速分别为20和5 μL/min
  8. 按 《微滴生成仪使用手册》调整流速增加反馈值(Feedback)以快速达到预定设置值
  9. 待微液滴生成稳定后,用疏水培养皿接收液滴用并显微镜观察其均匀性
  10. 微液滴稳定生成后,即可开始接收至备用的1%戊二醛油相溶液中
  11. 20 min后停止收集,轻微振荡加快微液滴固化,随后静置一段时间

3.壳聚糖微球的破乳清洗

取出底部微滴生成油

按V球:V破=1:2 加入破乳剂,并振荡破乳

离心处理并取出底部破乳剂

重复加入破乳剂和离心操作

*终得到固化后的壳聚糖微球(平均粒径:101.67 um,变异系数:2.53%)

 

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